血(xue)液檢測(ce)具(ju)有無(wu)創(chuang)、勻質(zhi)，易采(cai)集的優點，特別是針對服用TKI藥物進展的患者(zhe)，臨(lin)(lin)床上再次活檢比較(jiao)困難，使血(xue)液檢測(ce)成為(wei)臨(lin)(lin)床檢測(ce)EGFR突變的新選擇。

4.1 患者選擇：由于血液中含有腫瘤細胞較少，因此進行血液檢測應選擇IIIB或IV期晚期NSCLC病人，初治病人以檢測敏感突變為目的，EGFR-TKI治療病人以檢測T790M為目的，須知化療和TKI治療會降低檢測陽性率。

4.2 血液采集：采用EDTA抗凝管獲得10ml全血，不得使用肝素抗凝管（由于肝素使得DNA抽提得率降低并在DNA提取過程中難以去除，肝素也會導致PCR效率降低）。血液采集后立即輕柔顛倒10次，顛倒不充分或顛倒不及時可能發生凝血均導致提取結果欠佳。

4.3 血漿分離：得到的全血應盡快離心分離血漿，建議不超過2小時（禁止冷凍血液標本，建議4℃保存）。兩次充分離心（2000g10min, 8000g 10min）后小心吸取轉移血漿：

取血漿.jpg

4.4 血漿質量評價

4.4.1 血漿溶血：如發生嚴重溶血，標本不可用，血紅蛋白及其代謝產物可能抑制Taq酶活性，使PCR擴增效率明顯降低。下圖中1/2/3號樣本可以檢測，4號中度溶血，5號嚴重溶血，均需重新采血進行檢測。

血漿溶血.png

4.4.2 血脂過高：使血漿呈乳白色，低密度脂蛋白對熒光有屏蔽和吸收作用，故對PCR有干擾，可建議患者空腹采血。

4.5 血液運輸：如需長途運輸，建議采用專用常溫采血管（可在常溫放置7天不影響檢測結果）。

4.6 cfDNA提取：選擇CFDA認證的核酸提取試劑盒進行核酸提取。